第三章 脱靶（2 / 2）

还是有些照顾我啊，阮志宁低笑一声，随即开始将小白鼠待测的DNA样品，进行PCR扩增、纯化、定量和稀释处理。

让其他助手选择好电泳缓冲液、聚合物、染料和分子量标准品后，阮志宁将所有的东西装载到了相应的位置，将DNA样品按照规定的顺序和格式装载到样品板上。

“不像是新手嘛。”欧阳妍笑了一声，“真的是第一次接触这种实验？”

阮志宁嘿的笑了一声：“我还在没实验的情况下把解决可控核聚变的材料给解决了呢。”

“您是真没架子啊……”

说着，他将样品板放入仪器的板进样器中，设置好运行参数和数据采集软件。

下一秒，DNA分析仪启动，电泳运行开始运行。

“接下来只需要等待电泳运行结束，就可以查看和分析数据了。”阮志宁操作完最后一步，转头看向戴定波，“怎么样，我这一套操作流程没有任何不规范的地方吧？”

戴定波肯定道：“不愧是阮志宁。”

半个小时之后，电泳运行结束，各个参数都被显示在了仪器之上。

很快，阮志宁就在数据中找到自己失败的原因。

“我设计的sgRNA长度只有25个碱基，它以完全配对的形式结合到与靶基因相似的其他基因上，产生了脱靶效应。”阮志宁叹了一口气，“这种情况有点难以避免啊。”

戴定波点了点头，说道：“这是CRISPR-Cas9技术的一个普遍问题，sgRNA的长度和特异性是一个难以平衡的问题。如果sgRNA太短，就容易发生脱靶效应；如果sgRNA太长，就容易发生结合效率低或者结合不稳定的问题。而且，不同的基因组中，相似的基因序列可能有很多，很难找到一个完全没有脱靶风险的sgRNA。”

“没有完美的解决方案。”欧阳妍补充道，“我们可以设计特异性和稳定性都较高的sgRNA，可以通过突变Cas9核酸酶提高切割精度，我们可以利用同源重组修复来修复DNA双链断裂，但这些都不能完全解决问题。”

很多人都尝试过用一些化学修饰或者核酸工程来改变sgRNA的结构和性质，但是这些方法都有局限性和副作用。

戴定波甚至尝试过用一些其他的核酸酶或者核酸识别因子来替代Cas9，但是这些方法都需要重新设计和优化sgRNA。新的设计可能会解决旧的问题，可同样也会带来各种新的问题。

就像程序员修bug，经常会遇到老bug修好，但又出现了新bug的情况。

这就是所谓的“屎山”代码，和基因有异曲同工之妙。

基因编译技术已经发展到了一个很高的水平，可还是不能随心所欲地改变任何生物的基因。

“所以？”阮志宁觉得这个实验室的人搞这么多东西，就是为了给自己来一个“大的”。

此时，实验室的负责人邓立彬教授也走了过来，他一改昨日嘻嘻哈哈的表情，十分严肃的问道：“阮志宁院士，我想问一问你……你加入我们实验室，最终的目标是什么？”